蛋白实验双向电泳技术是等电聚焦和十二烷基硫酸铵-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照蛋白质等电点对蛋白质进行分离），然后再进行SDS-PAGE凝胶电泳（按照蛋白质相对分子量大小对蛋白质进行分离），最后经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。

　　等电位聚焦是一种根据分子携带的电荷不同来分离分子的技术。蛋白质同时具有酸性基团和碱性基团，在ph值低于等电点时会带有正电荷，在电场中向阴极移动。将蛋白质置于有递增ph梯度的凝胶中电泳，蛋白质所带电荷会一直减少，直到蛋白质移动到ph值与其等电点相同的区域。在此处，蛋白质静电荷为0，因此停止运动，最终蛋白质被“聚焦”在ph值和其等电点相同的窄带中。

　　蛋白实验蛋白质双向电泳实验注意事项：

　　1.TCA：TCA有毒性，有刺激性气味，损害呼吸道、眼睛及皮肤，称量时应戴手套及口罩，避免沾到皮肤及吸入，若不慎接触，应立即用大量水冲洗后就医。TCA易潮解，称量时应迅速。

　　2.PMSF：PMSF有毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，称量时应戴手套及口罩，避免沾到皮肤及吸入，若不慎接触，应立即用大量水冲洗后就医。PMSF溶于异丙醇后置于-20℃长期保存，保存中易析出结晶，用前取出待结晶溶化后再使用

　　3.甲醛：有刺激性气味，易挥发，其蒸汽强烈刺激粘膜、眼睛，具有致癌性。使用时应戴手套及口罩，在通风橱内操作。

　　4.甲醇：有毒，能引起失明。DTT：很强的还原性，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。beta-巯基乙醇：可致命，对呼吸道、皮肤和眼睛有伤害。丙酮：对神经系统有麻醉作用，并对黏膜有刺激作用。

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